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　　微泡菌ALW1的褐藻胶裂解酶AlgL7基因（GenBank收录号OM831233）有1 893 个碱基对，预测编码630 个氨基酸残基的蛋白质，理论等电点（pI）为4.40，理论分子质量为71.5 kDa。如图1a所示，系统发育分析显示，AlgL7与来自PL7家族的褐藻胶裂解酶处于同一分支，表明该褐藻胶裂解酶属于PL7家族。如图1b所示，保守结构域分析显示，AlgL7含有CBM结构域（Ile55～Tyr158）、F5/8 C型结构域（Ala202～Val322）和C端催化结构域（Phe364～His630）。C端催化结构域命名为CD1，包含F5/8 C型结构域和C端催化结构域的截短酶命名为CD2。此外，序列比对确定了微泡菌ALW1来源的AlgL7中含有QIH（Gln497～His499）、RTELREMLR（Arg428～Arg436）和YFKAG（Tyr600～Gly604）3 个保守区域，推测它们与促进底物识别和酶功能有关。

　　成功构建了AlgL7、截短体CD1和CD2的基因工程菌株，利用IPTG进行诱导表达后，进行重组蛋白的纯化，SDS-PAGE分析显示，目的蛋白成功纯化，AlgL7、CD1和CD2的分子质量分别约为71.5、32.0 kDa和60.0 kDa（图2a），与蛋白质的理论分子质量吻合。酶活力分析结果表明，以海藻酸钠为底物，AlgL7、CD1和CD2的比活力分别为125.1、125.9 U/mg和183.9 U/mg（图2b）。AlgL7和CD2的酶活力相比，CBM结构域截短会显著增强酶的催化活性，CD2是AlgL7全长酶活力的1.47 倍，来自Vibrio natriegens SK42.001褐藻胶裂解酶Aly01FL的CBM截短体也显示出类似酶活力增强的现象，来自Marinimicrobium sp. H1褐藻胶裂解酶AlgH-I的CBM截短体显示出酶活力降低的影响结果。CD1和CD2酶活力相比，F5/8 C型结构域截短会降低酶的催化活性，Flammeovirga sp. MY04来源褐藻胶裂解酶Aly5的F5/8 C截短体对海藻酸钠的酶活力也低于野生型酶，说明F5/8 C型结构域在维持酶活力方面具有重要作用。

　　如图5a所示，AlgL7及其截短体的最适反应pH值均为7.0，说明CBM和F5/8 C型结构域对酶的最适反应pH值无影响。褐藻胶裂解酶AlgH结构中F5/8 C型结构域也不改变酶的最适反应pH值。如图5b所示，截短体CD2在pH 3.0～6.0和8.0～11.0范围内的pH值稳定性高于AlgL7，表明CBM的去除提高了酶在酸性和碱性条件下稳定性。对褐藻胶裂解酶AlyL2-FL去除C端的CBM结构域，最适反应pH值由8.6降低至7.0，在pH 3.0～6.0范围内去除CBM的截短体保留酶活力远低于原始型酶。对褐藻胶裂解酶VxAly7B去除N端的CBM结构域，酶的最适反应pH值提高了0.6，在pH 3.0～6.0范围内残余酶活力略高于原始型酶。另外，本研究中图5b所示截短酶CD2相较于CD1在pH 3.0～6.0和10.0～11.0范围内pH值稳定性高于CD1，表明F5/8 C型结构域提高了酶在酸性和碱性条件下的稳定性。

　　克隆表达了微泡菌ALW1来源的褐藻胶裂解酶全长酶AlgL7及其两个截短酶CD1（催化结构域）、CD2（包含F5/8 C型结构域和催化结构域）。酶学性质的比较分析显示，CBM结构域降低了酶的催化活性、热稳定性和Vmax值，但提高了酶与底物的亲和力；F5/8 C型结构域提高了酶的催化活性、最适反应温度、热稳定性和Vmax值，但降低了酶与底物的亲和力。截短体CD2的酶活力和热稳定性得到显著提高，能降解海藻酸钠生成聚合度低的褐藻胶寡糖二糖、三糖和四糖。本研究明确了非催化模块CBM和F5/8 C型结构域对褐藻胶裂解酶AlgL7酶学性质的影响，获得了具有优良性质的截短酶CD2，扩大该褐藻胶裂解酶的应用范围。